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ATCC細胞株解凍和培養操作

更新時間:2017-07-18      點擊次數:1928
   ATCC細胞株解凍和培養操作
  凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后,可以立即解凍復蘇,去除二甲基亞砜(DSMO0)后進行細胞培養。如果不立即復蘇培養細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會立即下降。
  ATCC細胞株產品附帶一份產品資料單,其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到 ,產品資料單也可以在ATCC下載。此外產品還附帶細胞株具體生產批次的檢測報告,其中包含批次的特定信息,如每只凍存管中細胞的數量,無微生物污染的檢測結果等。
  操作推薦
  ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套,工作服和防護面具以避免任何事故發生。檢查包裝,查看是否有任何事破綻或滲漏。東側的ATCC細胞株應處于固體狀。
  將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出,理解復蘇培養,或迅速轉移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲。
  1、 先準備好細胞培養皿或細胞株培養瓶,及產品說明推薦的相應細胞培養基。并在37°c水浴中預先溫熱細胞培養基
  2、小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快,大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛融化,就應該將細胞凍存管取出水浴。
  3、在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
  4、小心擰干凍存管的頂部,將管內容物用1MI移槍轉移到9毫升培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125*g).小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5——8mI培養基并轉移到T125培養瓶。生長較快的細胞株可重懸于12——20mI培養基并轉移到T75培養瓶。
  5、將細胞培養容器置于細胞培養箱,在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養條件下進行卵育。細胞培養24小時候后應在顯微鏡下觀察細胞株形態和生長狀況 。
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